- Программируемая система для автоматического выполнения денатурации и гибридизации в процедурах FISH (флюоресцентная гибридизация in situ)
- работает с широким диапазоном проб
- обеспечивает предельную точность и воспроизводимость во всех тестах FISH
- значительно уменьшает время на ручные процедуры
- обеспечивает работу без необходимости постоянного присутствия персонала лаборатории
Свойства и преимущества
- небольшой размер
- 3 рабочих режима
- только гибридизация
- денатурация и гибридизация
- фиксированная температура - быстрый нагрев до нужной температуры (< 3 минут)
- точное поддержание температуры для всех 12 позиций слайдов
- улучшенный контроль влажности
- цифровая клавиатура обеспечивает простое программирование
- жидкокристаллический дисплей с подсветкой обеспечивает хороший интерфейс оператора
- может быть использован как термостат для слайдов с фиксированной температурой
- устраняет подготовку и утилизацию опасных растворов
- рамка для слайдов удерживает слайды на месте и обеспечивает вынимание одной рукой
- мембранная клавиатура упрощает очистку
- уменьшает время на ручные процедуры, так как комбинирует шаги в процедуре FISH
- сохраняет деньги, уменьшая трудовые затраты и расход реагентов
- соответствие CE & CUL
Технические характеристики
| Программы | 40 создаваемых пользователем протоколов |
| Емкость | 12 слайдов |
| Рабочая температура | 30-99°С |
| Точность температуры | ±1°С |
| Время процесса | от 0 до 100 часов |
| Контроль влажности | 20-80% |
| Фиксированная температура | имеется |
| Питание | 220 В, 50 Гц |
| Габариты | 14.6 х 22.8 х 45.1 см |
Сравнение системы ThermoBrite с традиционной процедурой гибридизации
| Ручная техника (примерное время/мин) |
Операции по подготовке | ThermoBrite (примерное время/мин) |
| Подготовка реагентов для денатурации | ||
| 10 | Подготовка раствора 70% формамида/2X SSC | не требуется |
| 10 | Подготовка растворов 70%, 85%, 100% этанола | не требуется |
| Программирование ThermoBrite | ||
| не требуется | Программирование ThermoBrite | 1 |
| Подготовка проб | ||
| 10 | Измерение температуры и погружение слайдов в денатурирующий раствор | не требуется |
| 4 | Дегидратация слайдов по 1 минуте на каждый в раствор этанола | не требуется |
| 1 | Высушивание слайдов фильтрованной бумагой | не требуется |
| 1 | Размещение слайдов на термостате для слайдов | не требуется |
| 1 | Нанесение 10 мкл probe mix для каждого слайда | 1 |
| 2 | Нанесение покровного стекла и немедленное заключение препаратов | 2 |
| Гибридизация | ||
| 1 | Размещение слайдов в подогретой увлажненной камере Добавление слайдов в ThermoBrite | 1 |
| 10 | Последующая инкубация, промывка слайдов в соответствии с инструкциями к наборам | 10 |
| 50 | Итого | 15 |
Флюоресцентная гибридизация in situ
Метод гибридизации in situ (на месте, лат.) основан на способности ДНК или РНК образовывать устойчивые гибридные молекулы с ДНК / РНК - зондами непосредственно на препаратах фиксированных хромосом и интерфазных ядер. С помощью этого метода можно определить точное местоположение практически любой последовательности ДНК или РНК непосредственно в клетке, клеточном ядре или на хромосомах.
Для проведения гибридизации in situ пригодны цитологические или гистологические препараты клеток любых тканей или органов, приготовленные по стандартным методикам. В условиях клинической цитогенетической лаборатории используют препараты культивированных лимфоцитов периферической крови, клеток цитотрофобласта хорионального эпителия, культивированных и некультивированных клеток амниотической жидкости, различных тканей из абортного материала, а также мазков клеток буккального эпителия и крови.
Метод гибридизации in situ имеет особое значение для практической цитогенетики, благодаря разработке неизотопного варианта, основанного на использовании зондов, меченных нерадиоактивными модифицированными нуклеотидами. Неизотопные варианты гибридизации на препаратах (в особенности флюоресцентные) имеют ряд преимуществ по сравнению с изотопными:
- большую разрешающую способность, которая равна разрешающей способности микроскопа (0,1 - 0,2 мкм),
- отсутствие необходимости в статистической обработке результатов
- быстроту и безопасность для здоровья исследователей
Кроме того, комбинация различно модифицированных проб, выявляемых с помощью разных систем детекции, позволяет одновременно определять местоположение двух и более последовательностей ДНК в одной клетке или на одной метафазной пластинке. А использование в качестве ДНК-зондов повторяющихся последовательностей, меченых флюорохромами, сокращает время проведения процедуры до 7-9 часов (классический неизотопный вариант гибридизации занимает два дня, изотопные варианты от недели до месяца), что особенно важно для пренатальной диагностики. Использование метода FISH в цитогенетической диагностике позволяет идентифицировать структурные хромосомные перестройки, устанавливать природу маркерных хромосом, проводить анализ численных нарушений хромосомного набора, как на метафазных хромосомах, так и в интерфазных ядрах.
